Методы лабораторной диагностики вирусного гепатита В
Ход определения
|
Ингредиенты (мл) |
Проба |
Контрольный раствор |
|
Субстратный раствор АсАТ |
0,5 |
0,5 |
|
Физиологический раствор |
- |
0,1 |
|
Предварительно инкубируют в течении 3 мин при 37°С | ||
|
Сыворотка крови |
0,1 |
- |
|
Перемешивают, инкубируют точно 60 мин при 37°С | ||
|
2,4 - ДНФГ |
0,5 |
0,5 |
|
Перемешивают и оставляют стоять 20 мин при температуре (от + 15°С до +25°С) | ||
|
0,4н NaOH |
5,0 |
5,0 |
Перемешивают, выдерживают 10 минут при комнатной температуре. Колориметрируют при длине волны 530 нм в кювете 1х1 мм, против холостой пробы.
Калибровка
В обозначенные пробирки вносят пипеткой отдельные растворы в вышеприведенном порядке. После добавления реактива 2 содержимое пробирок перемешивают и через 20 мин добавляют раствор NaOH. Через 10 мин измеряют оптическую плотность раствора №2-5 против раствора №1. строят калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации.
|
Раствор № |
Физиологический раствор (мл) |
Реактив 4 (мл) |
Реактив 1 (мл) |
Реактив 2 (мл) |
Раствор NaOH |
Конечная кат. конц. (мккат/л) | |
|
1 |
0,10 |
0,50 |
- |
0,50 |
5,00 |
0 | |
|
2 |
0,10 |
0,45 |
0,05 |
0,50 |
5,00 |
0,28 | |
|
3 |
0,10 |
0,40 |
0,10 |
0,50 |
5,00 |
0,56 | |
|
4 |
0,10 |
0,35 |
0,15 |
0,50 |
5,00 |
0,83 | |
|
5 |
0,10 |
0,30 |
0,20 |
0,50 |
5,00 |
1,11 | |