Методы лабораторной диагностики вирусного гепатита В

ацетат натрия

кофеин

2. 0,9% раствор хлористого натрия.

3. Диазосмесь:

а) Диазореактив Ι - сульфониловая кислота

б) Диазореактив ІІ - раствор нитрита натрия

Оборудование

1. Фотоколориметр КФК-3.

2. Колба мерная емкостью 200 мл, пробирки емкостью 10 мл (ГОСТ 1770-74).

. Пипетки емкостью 1 и 5 мл (ГОСТ 29227-91).

Приготовление рабочих растворов

1. Рабочий кофеиновый реактив

. Содержание флакона с кофеиновым реактивом (концентратом) количественно переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и, после растворения осадка, доводят дистиллированной водой до метки.

2. Диазосмесь

. Перед работой смешивают необходимое количество раствора сульфаниловой кислоты и раствора нитрита натрия в отношении 100:3.

Ход определения

В 3 пробирки (для общего билирубина, прямого и для контроля) вводят реактивы согласно таблице:

Для определения прямого билирубина

колориметрирование следует проводить через 5-10 минут после добавления диазосмеси (при температуре +18°С до +25°С), т.к. при длительном стоянии в реакцию вступает непрямой билирубин.

Для определения общего билирубина

пробу для развития окраски оставляют стоять на 20 минут (при температуре +18°С до +25°С), после чего колориметрируют. При дальнейшем стоянии окраска не изменяется. Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 530 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5 мм против воды. Из показателей, полученных при колориметрировании общего и прямого билирубина, вычитают показатель прямого билирубина.

Расчет

производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и прямого билирубина. Для определения уровня непрямого билирубина вычитают из показателя общего его содержания показатель прямого билирубина.

Калибровочный график

строится по готовому набору реактивов билирубин-эталон лиофизилированный, выпускаемый фирмой «Лахема» (Чехия).

Метод:

Иендрашика ф. Филисит