Результаты

В таблице 4 приведена сравнительная характеристика методов, рассматривающихся в данной работе. Разработанный нами метод (флуоресцентной детекции) позволяет получить данные о системе в любой момент времени, что является несомненным преимуществом над другими методиками. Методом флуоресцентной детекции можно определить параметр эффективности ингибитора IC50, концентрацию вируса не только на поверхности [VR]s(t), но и внутри клетки [VR]in(t), а также интересующие кинетические параметры системы «вирус - клетка». Время, затраченное на проведение эксперимента по которому определяются все необходимые параметры флуоресцентным методом ~ 30минут, что является наименьшим экспериментальным временем.

Заключение

Для исследования вирус- клеточного взаимодействия разработан новый метод флуоресцентной детекции, основанный на измерении степени активации клетки (изменение внутреклеточного pH) в ходе процессов связывания и проникновения вируса в клетку. Экспериментальные исследования показали, что ингибирование интенсивности флюоресценциии коррелирует с ингибированием инфекционности вируса гриппа, поэтому данный метод позволяет определять степень эффективности вирусного ингибитора (противовирусного препарата), что было подтверждено с помощью общепризнанного метода фокусообразующих единиц (ФОЕ). Используя метод флуоресцентной детекции были получены кинетические параметры системы «вирус- клетка», которые не только не противоречат ранее известным, но и совпадают в пределах разумных возможных допущений (что подтверждается данными полученными методами иммуноферметного анализа (ИФА), а также литературными данными [40])

Немаловажен и тот факт, что часто при работе с биологическими системами, наименьшее время проведения эксперимента говорит о лучшей точности определяемых параметров. Именно поэтому метод флуоресцентной детекции можно рассматривать как один из наиболее современных и точных методов современной биофизики.

Разработана кинетическая модель взаимодействия вируса с клеткой, учитывающая процесс эндоцитоза, которая достаточно хорошо описывает экспериментально наблюдаемый процесс активации лизо-сенсора DND-167 в результате рецептор- обусловленного эндоцитоза. Данная кинетическая модель позволяет решать обратную задачу флуоресцентной детекции и находить необходимые кинетические параметры системы, а также прогнозировать поведение штамма вируса на первых этапах процесса эндоцитоза (связывание и проникновение).

· Итоги работы:

o Разработан новый метод определения эффективности ингибитора и кинетических параметров системы «вирус-клетка» с применением флуоресцентной детекции

o Построена теоретическая модель процесса вирус-клеточного взаимодействия

· Выводы:

o Полученные IC50 с помощью стандартного вирусологического и нового флуоресцентного методов не отличаются на уровне значимости 5%

o Теоретическая модель, описывающая эндоцитоз, применима для расчетов кинетических параметров системы «вирус- клетка»

o Разработанная методика измерения степени активации методом флуоресцентной детекции в различные моменты времени позволяет судить о стадиях процесса эндоцитоза, в которых находится система «вирус-клетка».