Изменение активности миелопероксидазы нейтрофилов, после инкубации в окислительных условиях

С целью дальнейшего изучения бактерицидной способности полиморфоядерных гранулоцитов периферической крови использовали тест оценки спонтанной и индуцированной ферментативной активности миелопероксидазы специфических гранул с использованием ортофенилендиамина и перекиси водорода в качестве субстратов.

Результаты экспериментов по оценке спонтанной активности миелопероксидазы специфических гранул представлены на рисунке 19.

Рисунок 19 - Изменение спонтанной активности миелопероксидазы интактных и инкубированных в окислительных условиях нейтрофилов (p<0,05)

У интактных нейтрофилов наблюдается пик пероксидазной активности на 90 мин инкубации. 0,01 и 0,05 М Н2О2-обработанные нейтрофилы максимально освобождают миелопероксидазу специфических гранул также на 90 минуте инкубации, но ее активность и, возможно, количество, в 1,5-2 раза выше.

,005 М Н2О2-обработанные нейтрофилы имеют миелопероксидазную активность только в 0,5 раза достоверно выше интактных.

Достоверность всех полученных результатов оценивалась с использованием анализа ANOVA по Фридмену и критерия Вилкоксона для зависимых групп с уровнем значимости 0,05. (приложение А14-17)

Таким образом, в большей степени стимуляция спонтанной секреции и активности миелопероксидазы специфических гранул нейтрофилов на всем протяжении времени инкубации регистрируется только для 0,01 и 0,05 М Н2О2-обработанных нейтрофилов и незначительно для 0,005 М Н2О2-обработанных.

Возможно, это связано с особенностями процессов инициации движения и секреции специфических гранул, которые запускаются в результате активации рецепторного комплекса нейтрофилов. В отсутствии специфических лигандов активация рецепторов может происходить благодаря изменению подвижности и физических характеристик цитоплазматической мембраны, которые могут быть инициированы влиянием перекиси водорода. Очевидно, что этот процесс может иметь концентрационно-зависимый характер.

Изучение изменения миелопероксидазной активности специфических гранул нейтрофилов в процессе фагоцитоза проводили с использованием опсонизированной компонентами объединенной донорской сыворотки культуры St. aureus (рисунок 20).

Активность миелопероксидазы интактных клеток повышается, начиная с 30 до 90 минуты инкубации. 0,005, 0,01, 0,05 М Н2О2-обработанные нейтрофилы обладают максимальной миелопероксидазной активностью, которая в 2-3 раза достоверно превышает активность миелопероксидазы интактных клеток с максимумом на 90 мин инкубации.

Достоверность всех полученных результатов оценивалась с использованием анализа ANOVA по Фридмену и критерия Вилкоксона для зависимых групп с уровнем значимости 0,05. (приложение А18-23).

Рисунок 20 - Изменение активности миелопероксидазы интактных и инкубированных в окислительных условиях нейтрофилов в индуцированном тесте (p<0,05)

Полученные результаты согласуются с результатами экспериментов по определению спонтанной активности миелопероксидазы специфических гранул. Очевидно, что перекись водорода в концентрациях 0,01 и 0,05 М оказывает активирующее влияние на процессы либерализации специфических гранул нейтрофилов и увеличение ферментативной активности миелопероксидазы в процессе фагоцитоза. Неспецифическая активация рецепторного комплекса и самой мембраны нейтрофилов, возникающая в результате воздействия перекиси водорода, усиливается благодаря специфическому связыванию рецепторов со своими лигандами, что приводит к запуску множественных сигнальных ферментативных каскадов, инициации транскрипции генов, контролирующих процесс фагоцитоза и активации цитоскелета. Совокупное действие этих процессов обеспечивает быструю либерацию специфических гранул и увеличивает эффективность процессов киллинга и элиминации чужеродного агента.