Методы исследования

Методы определения макро и микрореологических параметров крови

Для определения гемореологических параметров использовали микрометоды. Опытную пробирку помещали в магнитное поле напряженностью 100 mT на 10 минут.

Оценка показателей гематокрита определена путем центрифугирования крови в микрокапилярах в течение 30 мин. При 3000 об/мин.

Количество гемоглобина определяли гимиглобинцианидным методом на спектрофотометре при длине волны 540 нм.

Индекс агрегации рассчитывали по отношению числа агрегатов к количеству неагрегированных эритроцитов при исследовании в камере Горяева.

Деформируемость эритроцитов определяли по скорости фильтрации суспензии эритроцитов в физиологическом растворе с геамтокритным показателем - 2% через фильтр фирмы ВЛАДИПОР (Владимир) с диаметром пор 2- 4,5 мк. Статистическая обработка данных производилась с помощью компьютерных программ.

Определение объемного соотношения плазмы и форменных элементов с помощью центрифугирования

Принцип. В основе работы центрифуги используется центробежная сила, развивающаяся при быстром вращении.

Подготовка к работе.

Центрифуга состоит из корпуса со съемной стеклянной крышкой. В центре под крышкой находятся ячейки, в которые помещаются микрокапилляры.

Ход определения.

Кровь набирают в микрокапилляр, который закрепляют в ячейке центрифуги.

В микрокапилляр не должны попадать пузырьки воздуха. Закрывают крышку и начинают центрифугирование в течение 30 минут при 3000 об/мин, затем, открывают крышку и вынимают микрокапилляр. Форменные элементы располагаются внизу микрокапилляра, а плазма - вверху. С помощью линейки вычисляют соотношение между объемами плазмы и форменных элементов.

Результаты выражаются в процентном соотношении.

Определение концентрации гемоглобина в крови с помощью спектрофотометра

Прибор состоит из осветителя, монохроматора, кюветного отделения, приемно-усилительного блока и микропроцессорной системы.

Принцип. В основу работы спектрофотометра положен принцип измерения отношения двух световых потоков: потока, прошедшего через исследуемый образец, и потока, падающего на исследуемый образец.

Подготовка к работе.

Включить спектрофотометр. Прогреть не менее 30 мин. Установить держатель от одного до трех исследуемых образцов, в четвертую позицию держателя может быть установлен контрольный образец. Установить держатель на каретку в кюветном отделении.

Установить требуемую длину волны, вращая рукоятку длин волн в сторону увеличения длин волн. Если при этом шкала повернется на большую величину, то возвратить ее назад на 5 - 10 нм и снова подвести к требуемому делению.

Установить рукояткой и рычагом в рабочее положение фотоэлемент и источник излучения, соответствующие выбранному спектральному диапазону измерения. Перед каждым новым измерением, когда неизвестна величина выходного напряжения, следует устанавливать ширину щели 0,15 нм во избежание засвечивания фотоэлементов. Снимать показания следует при плотно закрытой крышке кюветного отделения. Открывать крышку кюветного отделения следует только при установленной в положение ЗАКР рукоятке переключения шторки.

Ход определения

ПУСК. Сеть, «,». Установить рукоятку в положение ЗАКР., при этом на фотометрическом табло высветится значение сигнала в вольтах, пропорциональное значению темнового тока фотоэлемента. Нажимать клавишу «Ш(0)» до тех пор, пока не появится число в диапазоне от 0,05 до 0,1. Установить рукоятку в положение ОТКР.

Нажать клавишу «К(1)». Рукояткой ЩЕЛЬ установить на фотометрическом табло показание в диапазоне от 0,5 до 5,0. Наблюдая за миганием запятой на фотометрическом табло (частота мигания - один раз в секунду), отсчитать 10 с и нажать клавишу «К(1)».

Определение индекса агрегации эритроцитов при исследовании в счетной камере Горяева

Принцип. Для подсчета агрегированных и неагрегированных эритроцитов после центрифугирования крови эритрацитарную массу отделяют от плазмы, а затем смешивают эти компоненты в соотношении 1:180. Полученной суспензией заполняют специальную счетную камеру и подсчитывают под микроскопом число агрегированных и неагрегированных эритроцитов.

Подготовка к работе.

Гематокритный капилляр длинной 90 мм заполняется плазмой в объеме 0,09 мл, которая затем из капилляра переносится в пробирку. После этого процедура с использованием того же самого капилляра повторяется и в указанной пробирке оказывается 0,18 мл плазмы. Далее в этот же капилляр набирается 0,001 мл эритроцитной массы до метки, расположенной на расстоянии 1 мм от конца капилляра, через который эритроциты поступают в данную стеклянную микротрубочку. Затем эритроцитная масса переносится в пробирку с плазмой и в результате перемешивания получается суспензия с разведением 1:180, которая после этого вносится в камеру Горяева для подсчета агрегатов и отдельно расположенных эритроцитов.